1.精子穿透毛细玻璃管试验
这一试验是由Kremer首先创造并设计了Kremer精子穿透计。其基本原理是采用一根长10cm,内径为0。2-1。2mm的圆柱形毛细玻璃管,管内充满介质,毛细管一端用胶泥封口,另一端插大容量为0。5ml的精液池内,将穿透计置37℃恒温水浴箱中孵育1小时,取出置显微镜下观察并记录精子穿透高度,试验结果的评价标准有二种:
(1)1小时后观察毛细玻璃管内领先精子到达的高度(mm),以游动的活精子为止点。
(2)世界卫生组织推荐的方法:评价时间可为10分钟,30分钟,3小时或24小时。评价内容包括:
1)穿透深度:领先精子的高度(mm)。
2)穿透密度:选择精子最多的一段毛细管,计算其中的精子数。
3)活动力:按毛细管上1/3段中精子的前向运动分为0-Ⅲ级。
0级:无前向运动;
Ⅰ级:前向运动精子占25%;
Ⅱ级:前向运动精子占25%-50%;
Ⅲ级:前向运动精子>50%。
常用来作穿透试验的介质有以下几种:
①正常排卵期宫颈粘液:取材应为婚后近期内有生育史的妇女,身体健康,无生殖系统炎症。粘液的物理性状正常,粘滞性低,干燥后有羊齿状结晶形成。由于正常排卵期妇女宫颈粘液取材不易,一次用不完的粘液可贮存于试管中,管口用石蜡纸封闭,避免脱水,放入4℃冰箱保存,1周内仍可使用。
②动情期母牛宫颈粘液:其来源较人的容易且量多,国外文献报道牛的粘液的物理性状、颜色、拉丝度、弹性等与人相似,干燥后也可见羊齿状结晶,可以代替人的宫颈粘液。在取材时应先消毒牛的外阴,取得的粘液须经物理检查和穿透鉴定后方可使用。牛的宫颈粘液可保存于4℃冰箱,1周内仍可使用。
③精子营养液加白蛋白液:NaC17.721g,果糖1g,KH2PO40.136g,MgSO40.247g,Na2HPO43.581g,加蒸馏水至1000ml,调pH至7.4,存放4℃备用。用时取25%人体血清白蛋白1ml,加入6ml精子营养液混匀后即可使用。也有用150mg牛血清白蛋白溶于5ml精子营养液中做为穿透介质。
④鸡蛋清:新鲜鸡蛋黄周围较清稀部分的蛋清也是很好的穿透介质。蛋清的物理性状同排卵期妇女的宫颈粘液相似,透明无色,有粘滞性,内含多种蛋白质及有机物,精子在蛋清介质中穿透自由。
为保证试验结果的准确可靠,应注意以下几点:精液要求新鲜,禁欲5天,取精液后让其液化,1小时内做穿透试验;穿透介质要新鲜可靠,不可有污染;毛细管顶端装入介质并封闭后应静置10分钟,无气泡后才能使用,因气泡阻止精子前向运动;检测时系统的温度应保持恒温37℃。